Thèse Implication d'Appl1 et 2 dans la Signalisation de la Forme Activée de Met Met-Exon 14 dans le Cancer du Poumon H/F

Université de Lille

Établissement : Université de Lille
École doctorale : Biologie Santé de Lille
Laboratoire de recherche : Centre de Recherches en Cancérologie de Lille
Direction de la thèse : Anne CHOTTEAU-LELIEVRE ORCID 0000000270511792
Début de la thèse : 2026-10-01
Date limite de candidature : 2026-04-28T23:59:59

Les premières thérapies ciblées contre le récepteur MET ont été approuvées pour traiter les patients atteints de cancer du poumon porteurs de mutations MET. Ces mutations entraînent le saut de l'exon 14 (METex14Del) et la perte d'un domaine régulateur, ce qui renforce et active les voies de signalisation en aval, ainsi qu'un changement radical du programme transcriptionnel. Cependant, le mécanisme moléculaire contribuant à ces réponses aberrantes est encore mal compris. Comme les thérapies ciblant MET ne sont efficaces que chez la moitié de ces patients, une compréhension détaillée de sa signalisation est une question importante.
Nous avons démontré par des expériences de biotinylation de proximité dans des cellules vivantes que METex14Del pouvait interagir avec APPL1 et APPL2, connus pour promouvoir le trafic intracellulaire et pour avoir une influence sur l'expression des gènes. Nous émettons l'hypothèse que le recrutement d'APPLs par METex14 Del pourrait contribuer à sa signalisation aberrante.
Tout d'abord, nous déterminerons comment METex14 interagit avec les APPLs, contenant notamment un domaine de liaison à la phoshotyrosine, suggérant un recrutement actif par MET. Deuxièmement, nous déterminerons si les APPLs sont impliqués dans l'activation de la signalisation, les réponses cellulaires, y compris la migration et l'invasion, et le programme transcriptionnel, par le biais de leur silenciation. Troisièmement, nous chercherons à savoir si ce processus est impliqué dans la croissance tumorale, notamment par l'utilisation de souris humanisées pour le ligand à haute affinité de MET. Ce projet de thèse pourrait avoir des implications pour le traitement des patients en identifiant de nouvelles thérapeutiques.

Les mutations conduisant au saut de l'exon 14 dans le gène codant pour le récepteur tyrosine kinase MET (METex14Del) représentent une nouvelle classe d'altérations moléculaires identifiées dans 3 % des cancers du poumon non à petites cellules (CPNPC). Ces patients peuvent être traités par des thérapies ciblées, mais seulement la moitié d'entre eux y répondent, ce qui souligne la nécessité de mieux comprendre les mécanismes d'oncogénicité de METex14Del. Ces mutations entraînent la perte du domaine juxta membranaire impliqué dans la dégradation du récepteur. En conséquence, METex14Del induit une activation prolongée et plus forte des voies de signalisation ainsi qu'un programme transcriptionnel complexe impliquant la dérégulation de nombreux. Dans le but de décrypter les mécanismes moléculaires relayant l'activation de METex14Del, l'équipe a réalisé des expériences de biotinylation de proximité en cellules vivantes et a montré que le saut de l'exon 14 conduit à une augmentation de la détection de APPL1 et APPL2, des protéines adaptatrices connues pour favoriser l'activation des voies de signalisation et le trafic intracellulaire des récepteurs ayant une influence sur l'expression des gènes.

Nous faisons l'hypothèse que METex14Del recrute plus efficacement APPL1 et 2 favorisant ainsi ses réponses. Pour éprouver cette hypothèse, nous chercherons à savoir si METex14Del activé par son ligand l'HGF est capable de recruter APPL1 et 2 par des expériences de co- immunoprécipation, suite à leur surexpression et à partir des protéines endogènes. Par des immunofluorescences, nous déterminerons si APPL1 et 2 co-localisent avec MET durant son internalisation induite suite à sa stimulation. De façon à préparer des expériences fonctionnelles, nous mettrons au point l'extinction de APPL1 et 2 par siRNA.

Culture cellulaire, Co-immunoprécipitation, Immunofluorescence, siRNA, PLA