Thèse de Doctorat de l'Université Paris-Saclay en Biologie Médecine et Santé H/F

CNRS

Description du Poste Sujet De Thèse Contexte :Le syndrome émail-rénal-gingival (ERS) est une maladie rare associée à des allèles pathogènes du gène FAM20A. À ce jour, lamaladie ERS progresse inéluctablement, car aucun traitement n'est disponible pour intercepter la malformation maxillaire qui en résulte.La seule option est une chirurgie lourde et douloureuse chez l'adulte. Seule cette intervention permet de poser une prothèse dentaireapportant un certain soulagement aux patients handicapés. De plus, l'histoire naturelle de la maladie n'est pas définie. Les mécanismes conduisant à l'apparition et à la progression de la maladie ne sont pas clairs. Il n'existe aucun outil moléculaire pour le diagnostic et le pronostic.Objectif :Ce projet de thèse s'inscrit dans le cadre d'un projet de recherche multidisciplinaire financé par l'Agence nationale de la recherche(ANR). Il vise à approfondir la compréhension de la physiopathologie de l'ERS et à mettre en place de nouveaux outils de diagnostic et de traitement basés sur les vésicules extracellulaires (VE). Les VE sont de très petites particules (40-160 nm) entourées d'unebicouche lipidique et transportant une cargaison riche en lipides, protéines, glucides, acides nucléiques (ADN, ARNm et miARN) ainsique divers facteurs de croissance. Cependant, le rôle fonctionnel des miARN dans la cargaison des VE reste inconnu dans le SRE. Lapurification et la caractérisation des vésicules extracellulaires restent une étape clé pour leur utilisation comme marqueursdiagnostiques ou comme agents thérapeutiques, ce qui représente aujourd'hui une réelle limitation.Responsabilités du projet de doctorat :Le candidat retenu sera basé dans les laboratoires de l'Université Paris-Saclay et de l'Institut Imagine et sera chargé de :- Comprendre comment produire des vésicules extracellulaires (VE) à partir de cultures de cellules primaires humaines, y compris lemaintien et l'expansion des cellules dans des conditions optimisées et contrôlées.- Isoler et purifier les VE à partir de surnageant de cultures cellulaires à l'aide de diverses méthodes établies telles quel'ultracentrifugation et la chromatographie d'exclusion stérique.- Caractériser les VE à l'aide de techniques analytiques avancées disponibles en laboratoire, notamment le Western blotting, la diffusiondynamique de la lumière (DLS), la cryo-microscopie électronique à transmission (cryo-TEM) et l'analyse de suivi des nanoparticules(NTA), entre autres.- Évaluer l'absorption cellulaire des VE in vitro à l'aide de modèles cellulaires appropriés.- Évaluer la biodistribution in vivo des VE après injection chez la souris.Profil et compétences recherchées- Culture cellulaire de base, en particulier culture cellulaire primaire ;- Connaissance des techniques de purification et des méthodes de caractérisation des EV ;- Expérience pratique des techniques de biologie cellulaire (par exemple, PCR en temps réel, Western blot, ELISA, microscopie àimmunofluorescence, cytométrie en flux) ;- Fort intérêt pour la recherche pluridisciplinaire ;- Bonnes compétences en communication et capacité à travailler au sein d'une équipe multidisciplinaire. Votre Environnement de Travail Cette thèse se déroulera principalement à l'Institut Galien Paris-Saclay (IGPS, UMR CNRS 8612). S'agissant d'un projet multidisciplinaire, le/la candidat.e sera également amené(e) à travailler au sein de l'institut partenaire du projet (Institut Imagine, Sorbonne Université (Paris Cité)). L'étudiant.e aura comme directrice de Thèse le Dr. Mariana VARNA (Université Paris-Saclay , encadrement 35%). II/elle sera co-encadré.e par le Dr. Sameh OBEID (Université Paris-Saclay , encadrement 35%) ainsi que par le Dr. Nunthawan NOWWAROTE (Sorbonne Université, encadrement 30%).A l'Université Paris-Saclay, l'étudiant.e sera en charge de purifier et de caractériser les vésicules extracellulaires ainsi que d'une partie des évaluations in vitro et in vivo.A Sorbonne Université, l'étudiant.e sera en charge d'obtenir les vésicules extracellulaires à partir des lignées cellulaires; Il/elle sera en charge d'une partie des évaluations in vitro et in vivo.Des réunions hebdomadaires selon planifiées afin de suivre l'avancement des travaux. Des présentations orales auront lieu devant les membres des équipes impliquées mais également dans le cadre des journées 'Day and post-doc day' de l'Institut Galien.L'étudiant.e bénéficiera d'un accès au matériel propre à l'Institut Galien, de la plateforme de recherche IPSIT (Ingénierie et Plateformes au Service de l'Innovation Thérapeutique, Université Paris-Saclay), ainsi que du materiel mis à disposition sur le site de l'Institut Imagine (Sorbonne Université, Paris-Cité). Contraintes et risques Pas de risques spécifiques, les risques associés au poste correspondent aux risques habituels liés au travail dans un laboratoire de biologie cellulaire et moléculaire, de biochimie et, le cas échéant en animalerie (manipulation d'échantillons biologiques, de cultures cellulaires et de produits chimiques). Ces risques sont maîtrisés par le respect des procédures d'hygiène et de sécurité (port des équipements de protection adaptés, travail sous sorbonne....).Les expérimentations animales seront réalisées dans les structures agréées conformément aux autorisations réglementaires et aux règles relatives à l'éthique et au bien-être animal.Le/la doctorant.e devra respecter les consignes de sécurité et les procédures en vigueur à l'IGPS, ainsi que sur le site partenaire de l'Institut Imagine-Université Paris Cité. Le projet implique également des déplacements ponctuels entre les deux sites. Rémunération et avantages Rémunération 2300 brut/mois Congés et RTT annuels 44 jours Pratique et Indemnisation du TT Pratique et indemnisation du TT Transport Prise en charge à 75% du coût et forfait mobilité durable jusqu'à 300€ À propos de l'offre Référence de l'offre UMR8612-SAMOBE-002 Section(s) CN / Domaine de recherche Biologie cellulaire, développement, évolution-développement À propos du CNRS Le CNRS est un acteur majeur de la recherche fondamentale à une échelle mondiale. Le CNRS est le seul organisme français actif dans tous les domaines scientifiques. Sa position unique de multi-spécialiste lui permet d'associer les différentes disciplines pour affronter les défis les plus importants du monde contemporain, en lien avec les acteurs du changement. Le CNRS Les métiers de la recherche