Détail du poste
Établissement : Nantes Université École doctorale : École doctorale Biologie Santé Laboratoire de recherche : Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Intégrée Nantes Angers Direction de la thèse : Christelle RETIERE-NICOLAU ORCID 0000-0001-5943-6990 Date limite de candidature : 2026-05-22T00:00:00 La leucémie aiguë myéloïde (LAM) est un cancer du sang au pronostic défavorable, avec une survie à 5 ans estimée à 30%. L'allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) demeure la principale approche curative, mais plus d'un tiers des patients rechutent dans les deux ans suivant la greffe, malgré une reconstitution hématologique complète. Nous avons récemment montré que les cellules « Natural Killer » (NK) qui apparaissent de façon massive après greffe de CSH sont immatures et pas assez fonctionnelles contre les LAM, nécessitant le développant d'immunothérapies cellulaires basées sur les NK capables de renforcer l'effet du greffon contre la leucémie sans aggraver la toxicité. Les cellules NK présentent de nombreuses caractéristiques qui en font des candidats de choix en immunothérapie. Ce sont des effecteurs cytotoxiques efficaces contre de nombreuses cibles cancéreuses et tout particulièrement contre les hémopathies malignes. La structuration phénotypique et fonctionnelle du répertoire NK est très dépendante des marqueurs génétiques KIR et HLA et plusieurs sous-populations coexistent avec différents stades de différenciation. Les cellules sont naturellement capables d'éliminer les cellules cancéreuses. Leur activation repose sur un équilibre entre les signaux reçus par les récepteurs inhibiteurs et les récepteurs activateurs. Les récepteurs inhibiteurs, KIR et CD94/NKG2A, se lient aux molécules HLA de classe I, dont l'expression peut être altérée à la surface des cellules leucémiques. Les récepteurs activateurs se lient à des ligands dont l'expression est induite à la surface des cellules leucémiques. Nos travaux récents ont identifié un nouvel axe inhibiteur majeur, KIR2DL5-PVR. En effet, KIR2DL5 apparait comme un véritable frein des réponses NK, capable de limiter fortement leur fonction cytotoxique vis-à-vis des LAM qui expriment PVR, un ligand induit par le contexte leucémique. Le rôle biologique de KIR2DL5 demeure largement méconnu, tant dans la biologie des NK que dans le contexte tumoral. Ce projet vise à mieux appréhender la biologie du KIR2DL5 . Une étude des mécanismes sous-jacents à l'inhibition des cellules NK par l'axe KIR2DL5-PVR sera menée. Le principal verrou du développement des immunothérapies dans la LAM réside dans l'absence d'un antigène véritablement spécifique de la cellule leucémique. La plupart des cibles potentielles sont en effet partagées avec les progéniteurs myéloïdes normaux, exposant à un risque de destruction de cellules saines exprimant le même antigène que la tumeur. L'un des objectifs du projet est de développer une stratégie d'immunothérapie NK reposant sur l'axe KIR2DL5-PVR. Un CAR-NK KIR2DL5 efficace constituerait ainsi un axe d'immunothérapie original adapté au traitement de nombreux patients, car PVR est largement exprimé dans de nombreux cancers solides. L'objectif de ce projet de thèse est multiple : 1) Documenter les potentiels ligands du KIR2DL5 : Bien que PVR ait été identifié comme ligand du KIR2DL5, nous émettons l'hypothèse que le KIR2DL5 pourrait interagir avec d'autres ligands . Afin d'identifier d'éventuels ligands additionnels, nous souhaitons développer un CAR-NK exprimant le domaine extracellulaire de KIR2DL5, qui servira de récepteur rapporteur pour cribler différentes cibles potentielles. Cet axe est particulièrement important dans la perspective du développement d'une immunothérapie ciblant KIR2DL5. En effet, démontrer que KIR2DL5 ne reconnaît pas d'autres ligands permettra de limiter le risque d'effets off-target et ainsi de garantir une stratégie thérapeutique plus sûre. 2) Réaliser une caractérisation phénotypique et fonctionnelle approfondie du KIR2DL5 à partir des donneurs sains : nous avons mis en évidence que l'expression du KIR2DL5 est associée à l'expression des KIR, tandis que celui-ci est peu co-exprimé avec le NKG2A ou le CD57. Ces données préliminaires suggèrent une expression hétérogène qui nécessite plus d'investigations sur le plan phénotypique. De plus, PVR se lient également aux récepteurs inhibiteurs CD96 et TIGIT ainsi qu'au récepteur activateur DNAM-1. Nous souhaitons définir comment ces récepteurs NK spécifiques de PVR interfèrent avec le rôle du KIR2DL5. Au niveau fonctionnel, nous souhaitons étudier le potentiel impact du KIR2DL5 sur l'éducation des cellules NK, mécanisme essentiel à la bonne fonctionnalité des cellules NK. 3) Déterminer l'impact du KIR2DL5 chez des patients leucémiques : l'étude du KIR2DL5 sera également réalisée chez des patients atteints de leucémie, le phénotype des cellules NK étant impacté chez ces patients. Nous souhaitons documenter l'expression du KIR2DL5 à la surface des cellules NK de patients atteints d'une leucémie au diagnostic. Cette étude sera également réalisée chez des patients ayant reçus une greffe de CSH, traitement standard de la leucémie. Ainsi, nous pourrons suivre l'expression du KIR2DL5 au cours de la reconstitution hématopoïétique. Les prélèvements de sang et/ou de moelle osseuse seront obtenus via les hématologues du CHU de Nantes (Pr Patrice CHEVALIER et Dr Thierry GUILLAUME), membres de notre équipe de recherche avec lesquels nous collaborons depuis de nombreuses années sur cette thématique. Une Recherche Impliquant la Personne Humaine de type 2 (RIPH2) a reçu un avis favorable du CPP de l'Ile de France III (n°2025-A01929-40, Réf : RC25_0333) dans l'optique de collecter ces échantillons biologiques dans le suivi des patients atteints d'une LAM, LAL ou d'un syndrome myélodysplasique (ENKLAMDS). 4) Développer une stratégie d'immunothérapie NK basée sur l'axe KIR2DL5-PVR : nous souhaitons développer un CAR-NK KIR2DL5 capable de cibler et d'éliminer les cellules leucémiques PVR+. Nous souhaitons tester deux constructions, la première correspondant au récepteur reporter décrit précédemment et une deuxième correspondant à une forme mutée du KIR2DL5, connue pour augmenter son affinité à PVR. L'efficacité des CAR-NK KIR2DL5 sera évaluée par cytométrie en flux via des tests de dégranulation en ciblant les NK d'intérêt vis-à-vis de cibles PVR+ et PVR-. En parallèle, la capacité des cellules NK à lyser les cibles leucémiques PVR+ sera évaluée par la technologie incucyte qui permettra d'évaluer la mort des cibles leucémiques préalablement transduites pour exprimer la EGFP. L'expression PVR des lignées leucémiques PVR+ sera éteinte par des approches CrispRCas9 et parallèlement, les lignées leucémiques PVR- seront transduites avec un lentivirus permettant l'expression de PVR. En perspectives de ces travaux, nous souhaitons conforter les résultats fonctionnels in vitro par une approche in vivo dans un modèle murin NSG avec une cible leucémique PVR+ luciférase+. Ce projet de recherche est financé par l'appel d'offre recherche de la Ligue contre le cancer 2025 pour une durée de 18 mois (01/01/2026 au 30/06/2027). Une demande de financement Prix jeunes chercheuses chercheurs 2026 va également être déposée auprès du Cancérôpole Grand Ouest. Le candidat bénéficiera d'un encadrement scientifique assuré par les 2 directrices de thèse, qui ont une expertise dans le domaine de l'immunobiologie des cellules NK et de l'aide technique de deux techniciennes de recherche. Ces travaux de thèse s'appuient sur des biocollections, établies et caractérisées dans notre laboratoire. Une déclaration de préparation et de conservation de tissus et de cellules issus du corps humain et de leurs dérivés, des organes, du sang, de ses composants ou de des produits dérivés, y compris la constitution et l'utilisation de collections biologiques d'échantillons humains (DC-2014-2340) concernant toutes les activités de recherche de notre laboratoire a été déposée auprès du Ministre chargé de la Recherche et a reçu un avis favorable du CPP de Tours (numéro 2015-DC-1). Nous avons par ailleurs actualisé notre autorisation d'utilisation confinée d'organismes génétiquement modifiés à des fins de recherche (DUO n°11073) avec l'agrément d'installation n°L2-1167 (3/11/23-28). Les typages des gènes HLA-A, -B et -C de la biocollection de donneurs sains et de patients atteints d'une leucémie aiguë sont réalisés par le laboratoire d'Histocompatibilité de l'EFS de Nantes (Dr A. WALENCIK). Le génotypage KIR sont réalisés par PCR multiplex et le typage allélique KIR est réalisé par NGS dans notre laboratoire (Nolwenn LEGRAND et Dr Katia GAGNE). Par ailleurs, notre laboratoire suit une démarche de management intégré suivant la norme ISO9001 garantissant la qualité, la reproductibilité et la traçabilité des expériences. Les typages des gènes HLA-A, -B et -C de la biocollection de donneurs sains et de patients atteints d'une leucémie aiguë ont été réalisés par le laboratoire d'Histocompatibilité de l'EFS de Nantes (Dr A. Walencik). Le génotypage KIR ont été réalisés par PCR multiplex et le typage allélique KIR est réalisé par NGS dans notre laboratoire (Nolwenn Legrand et Katia Gagne). Par ailleurs, notre laboratoire suit une démarche de management intégré suivant la norme ISO9001 garantissant la qualité, la reproductibilité et la traçabilité des expériences. Ce projet de recherche doit nous permettre de mieux comprendre l'immunobiologie du récepteur KIR2DL5 et son impact dans le contexte de la leucémie. De plus, ce projet mène au développement d'un CAR-NK KIR2DL5, une innovation qui pourrait avoir un impact significatif dans le domaine des immunothérapies pour le traitement des leucémies. De plus, l ' obtention d ' un CAR-NK KIR2DL5 efficace est un axe d ' immunothérapie original, qui s ' applique aussi bien chez des patients leucémiques que chez des patients atteints de cancers solides. En effet, PVR n ' est pas seulement exprimé chez les patients leucémiques, puisqu'il est également surexprimé dans de nombreux cancers solides. Ainsi, ce projet propose une immunothérapie ambitieuse, applicable à de nombreux patients atteints de cancer. L'exploration de l'efficacité de notre modèle dans les cancers solides sera réalisée via des collaborations locales (INCIT et CRCI2NA).
Publiée le 05/05/2026 - Réf : ef34235ccd48fe173bcba5e2c575e75e