Thèse Vecteurs Dérivés de l'Herpès Simplex Virus de Type 1 Appliqués à la Restauration d'Isoformes Cérébrales de la Dystrophine. H/F

Doctorat_Gouv

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie neuromusculaire caractérisée par une dégénérescence musculaire. Cependant, près de 50% des patients atteints de DMD présentent des comorbidités neurodéveloppementales significatives, telles qu'une déficience intellectuelle, des troubles du spectre de l'autisme et des déficits de l'attention, qui demeurent non pris en charge par les thérapies actuelles.
Ces symptômes du système nerveux central (SNC) sont liés aux mutations des trois principales isoformes de la dystrophine exprimée dans le cerveau, qui partagent un C-terminus commun et sont désignées selon leur poids moléculaire (i) Dp427 (ii) Dp140 (iii) Dp71. Ces isoformes cérébrales de la dystrophine jouent des rôles essentiels dans la fonction synaptique et le développement cérébral. Déterminer si la restauration de la dystrophine peut améliorer les troubles neurocomportementaux constitue un objectif majeur et urgent de la recherche sur la DMD. Toutefois, en raison de la grande taille des séquences codantes du gène DMD, les thérapies géniques actuelles basées sur les vecteurs AAV ne permettent pas la délivrance de la dystrophine de pleine longueur au cerveau.
Le virus de l'Herpès Simplex de type 1 (HSV-1) est un pathogène naturellement neurotrope possédant un génome encapsidé de 152 kpb, pouvant être décliné en deux types de vecteurs défectifs : les vecteurs recombinants et les vecteurs amplicons. Les vecteurs recombinants sont dépourvus des gènes nécessaires au cycle réplicatif lytique. Ils sont produits sans virus auxiliaire et possèdent une capacité d'emport d'environ 30 kpb. Toutefois, ils conservent encore des gènes viraux. Les vecteurs amplicons HSV-1, quant à eux, ne contiennent que des séquences virales minimales (origine de réplication et séquence d'empaquetage), rendant l'utilisation d'un virus auxiliaire indispensable. Ils offrent une capacité d'emport de 150 kpb. Néanmoins, les méthodes actuelles de production empêchent leur utilisation en clinique, en raison soit de titres viraux insuffisants, soit d'une contamination par le virus auxiliaire.
Nous visons à développer une nouvelle génération de vecteurs amplicons dérivés de l'Herpès permettant de surmonter les limitations actuelles de production. Cette approche basée sur les amplicons HSV-1 offrira (i) une grande capacité d'emport, permettant la délivrance de cassettes d'expression complexes et multiples, tout en (ii) ne contenant aucun gène viral, réduisant ainsi le risque d'effets indésirables.
Cette nouvelle génération de vecteurs amplicons dérivés du HSV-1 sera ainsi conçue pour restaurer Dp427 seule ou en combinaison avec Dp140 chez les souris mdx52 (dépourvues de Dp427 et Dp140), ainsi que les trois isoformes cérébrales de la dystrophine (Dp427, Dp140 et Dp71) chez les souris Dmd-null (dépourvues de toutes les dystrophines cérébrales). L'impact clinique sur les déficits neurocomportementaux sera évalué par des tests comportementaux. Cette approche ouvrira la voie au traitement de l'atteinte cérébrale dans la DMD actuellement limitée par les vecteurs AAV.

L'équipe d'accueil dispose à la fois d'une expertise importante sur les vecteurs viraux dérivés de l'HSV-1 (Pr Charles Joussain PUPH), mais également une expertise internationale sur la dystrophie musculaire de Duchenne et ses modèles animaux, notamment dans le domaine des thérapies de saut d'exons par oligonucléotides antisens ou AAV (Dr Aurélie Goyenvalle DR2 Inserm).

L'objectif de ce projet est de construire des vecteurs dérivés de l'HSV-1 de type amplicon présentant des spécificités moléculaires compatibles avec les normes industrielles et cliniques, dans l'optique de restaurer les isoformes cérébrales de la dystrophine.

-Clonage bactérien
-Production virale
-Modèle murin
-Modèle ex-vivo et in-vitro (culture primaire, culture organotypique)
-Test Elisa, Transparisation, IHC, séquençage (nanopore)